膠體金（colloidal gold），又稱金溶膠（gold solution），是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)，近10多年來膠體金標(biāo)記已經(jīng)發(fā)展為一項(xiàng)重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展，并越來越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視。

膠體金的應(yīng)用:

１、膠體金在電鏡水平的應(yīng)用。膠體金應(yīng)用電鏡水平的研究最早，發(fā)展最快，應(yīng)用最廣泛。其最大優(yōu)點(diǎn)是可以通過應(yīng)用不同大小的顆粒或結(jié)合酶標(biāo)進(jìn)行雙重或多重標(biāo)記。直徑為3～15nm 膠體金均可用作電鏡水平的標(biāo)記物。3～15nm 的膠體金多用于單一抗原顆粒的檢測，而直徑15nm 多用于檢測量較多的感染細(xì)胞。

膠體金用于電鏡水平的研究，主要包括：①細(xì)胞懸液或單層培養(yǎng)中細(xì)胞表面抗原的觀察。②單層培養(yǎng)中細(xì)胞內(nèi)抗原的檢測。③組織抗原的檢測。金標(biāo)記在電鏡水平的應(yīng)用，主要方法包括：包埋前染色、包埋后染色、免疫負(fù)染色、雙標(biāo)記技術(shù)和原位雜交技術(shù)等。實(shí)驗(yàn)證明，該法樣本用量少、檢測速度快、對(duì)比明顯、操作簡單、敏感性和特異性高，既可用于抗原檢測，也可用于抗體檢測，因此，可同時(shí)適用于科研和診斷。

２、膠體金在光鏡水平的應(yīng)用。膠體金同樣可用做光鏡水平的標(biāo)記物，取代傳統(tǒng)的熒光素、酶等。各種細(xì)胞涂片、切片均可應(yīng)用。主要用于：①用單克窿抗體或抗血清檢測細(xì)胞懸液或培養(yǎng)的單層細(xì)胞的膜表面抗原。②檢測培養(yǎng)的單層細(xì)胞胞內(nèi)抗原，③組織中或亞薄切片中抗原的檢測。 膠體金用于光鏡水平的研究，可以彌補(bǔ)其它標(biāo)記物不可避免的本底過高和內(nèi)部酶活性干擾等缺點(diǎn)。

３、膠體金在流式細(xì)胞儀中的應(yīng)用。應(yīng)用熒光素標(biāo)記的抗體，通過流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)分析細(xì)胞表面抗原，是免疫學(xué)研究中的重要技術(shù)之一。但由于不同熒光素的光譜相互重疊，區(qū)分不同的標(biāo)記困難，因此必須尋找一種非熒光素標(biāo)記物，用于流式細(xì)胞計(jì)數(shù)。這樣可以同時(shí)進(jìn)行幾種標(biāo)記。該標(biāo)記物必須能夠改變散射角，膠體金可以明顯地改變紅激光散射角，因而可以作為流式細(xì)胞儀的標(biāo)記物之一。

４、凝集試驗(yàn)：單分散的免疫金溶膠呈清澈透明的溶液，其顏色隨溶膠顆粒大小而變化，當(dāng)與相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生專一性反應(yīng)后出現(xiàn)凝聚，溶膠顆粒極度增大，光散射隨之發(fā)生變化，顆粒也會(huì)沉降，溶液的顏色變淡甚至變成無色，這一原理可定性或定量地應(yīng)用于免疫反應(yīng)。

５、免疫印跡技術(shù)(immunoblotting)：免疫印跡是一種較新的免疫化學(xué)技術(shù)。用聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質(zhì)分離，得到的區(qū)帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，然后用酶免疫法（或免疫熒光、ＲＩＡ）進(jìn)行定量。免疫膠體金也可用于該法的定量。轉(zhuǎn)移后的硝酸纖維素膜與某特異性的抗體保溫后，再與經(jīng)葡萄球菌Ａ蛋白致敏的膠體金溫育，徹底洗去多余的膠體金，根據(jù)膜上膠體金顆粒顏色深淺可測知樣品中的特異性抗原。

６、膠體金在肉眼水平的應(yīng)用。膠體金取代傳統(tǒng)三大標(biāo)記物，用于肉眼水平的免疫檢測中。除了膠體金本身具有的特點(diǎn)外，還有以下優(yōu)點(diǎn)：①試劑和樣本用量極小，樣本量可低至1～2ul；②不需γ－計(jì)數(shù)器、熒光顯微鏡、酶標(biāo)檢測儀等貴重儀器，更適于現(xiàn)場應(yīng)用； ③沒有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質(zhì)參與；④實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以長期保存；⑤時(shí)間大大縮短，提高了檢測速度。金標(biāo)過程中，無共價(jià)鍵形成，是一定離子濃度下的物理吸附。因此幾乎所有的大分子物質(zhì)都可被金標(biāo)記，標(biāo)記后大分子物質(zhì)活性不發(fā)生改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，膠體金的敏感性可達(dá)到 ELISA的水平。而結(jié)合銀染色時(shí)，檢測的敏感性更大大提高。

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